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Giunzioni neuromuscolari, Nervi, Spinale, Atassia, Anticorpi e Biopsia, Informazioni per i pazienti TRADUZIONE di Natale Marzari |
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CLINICHE LABORATORY
PRINCIPLE:
Questa colore è usati per the demonstration of glycogen. Tissue sezioni sono primi oxidized by periodic acid. The ossidativa process Risultano nei la formazione of aldehyde groupings through carbon-to-carbon bond cleavage. Free hydroxyl gruppi devono be presenti per ossidazione to take place. Ossidazione è completed when it reaches the aldehyde stage. The aldehyde gruppi sono detected by the Schiff reagent. A colorless, unstable dialdehyde composizione è formato e then transformato to the colored final produce by restoration della quinoid chromophoric ragruppante.
QUALITY ASSURANCE:
The Colorazione PAS con diastase o -amylase digestion ha
histochemical specificità per glycogen. Skeletal muscolare normalmente contiene
glycogen e è spesso recommended come a positive controllo tissue.
SPECIMEN REQUIRED: Snap frozen human striated muscolare. (Use the isopentano freezing method previously descritti.)
METHOD:
Fixation: Nessuno, use
snap frozen tissue.
Tecnica: Cut 10 - 16 micron (12 µm) sezioni nei
cryostat dal snap frozen biopsy. Attach uno o più sezioni to a No.1½, 22 mm
square coverslip.
- Equipment:
- Ceramic colorazione rack - Thomas Scientific #8542-E40
- Columbia colorazione dish - Thomas Scientific #8542-C12
- Columbia colorazione dish (jar) - Thomas Scientific #8542-E30
- Forceps
- Latex gloves
- Reagents:
- Absolute alcohol (100% ethanol) - Quantum, FLAMMABLE store at room temp. nei a flammable cabinet
- Glacial Acetic Acid -Fisher A507-500, CORROSIVE store at room temperature
- Amylase - Sigma A-6505, store at room temperature
- Chloroform - Baxter 049-4, FLAMMABLE CARCINOGEN store at room temperature nei a flammable cabinet)
- Periodic Acid - Sigma P7875, store at room temperature
- Permount - Fisher SP15-100, FLAMMABLE HEALTH HAZARD
- Reagent alcohol, ACS - histological Fisher A962-4 o HPLC A995, FLAMMABLE, TOXIC,TERATOGENIC, store at room temperature In flammable cabinet
- Schiff Reagent - Harleco 6073/71, store at room temperature
- Xylenes - Fisher #HC700-1GAL, FLAMMABLE, store room temperature nei
flammable cabinet)
Solutions:
- I. Carnoy's Fixative (store at room temperature) PREPARE IN A FUME HOOD
- Alcohol, 100 % 60 ml
- Chloroform 30 ml
- Glacial acetic acid 10 ml
- II. Periodic Acid Solution, 0.5 % (w/v) PREPARE FRESH FOR EACH STAIN
- Periodic acid 50 mg dissolved nei deionized acqua 10 ml
- III. Alcohol 50 %
- Reagent alcohol ~50 ml
- Deionized acqua ~50 ml
- IV. Alcohol 70 %
- Reagent alcohol ~70 ml
- Deionized acqua ~30 ml
- V. Alcohol 80 %
- Reagent alcohol ~80 ml
- Deionized acqua ~20 ml
- VI. Alcohol 95 %
- Reagent alcohol ~95 ml
- Deionized acqua ~ 5 ml
Staining Procedure:
- Place the coverslip con section nei a columbia colorazione dish (Thomas
Scientific #8542- E40).
- Aggiunge Carnoy's fissativi to dish per 10 minuti.
- Rinse molto careinteramente con numerosi exchanges of deionized acqua.
Sections può wash off!!
- Aggiunge Periodic Acid soluzione to colorazione dish per 10 minuti.
- Rinse molto careinteramente con numerosi exchanges of deionized acqua.
Sections può wash off!!
- Aggiunge Shiff Reagent per 5 minuti
- Careinteramente wash con tre exchanges of tap o deionized H2O.
- Dehydrate nei ascending alcohol solutions (50%, 70%, 80%, 95% x 2, 100% x 2)
nei columbia colorazione dish(jar)s - Thomas Scientific #8542-E30.
- Chiari con xylene (3 - 4 x ) quindi nei columbia colorazione dish(jar) -
Thomas Scientific #8542-E30.
- Mount coverslip onto a labeled glass slide con Permount o alcuni altre
suitable organico mounting medium
Risultati:
Glicogeno, neutral mucosubstances, membrana basale, collagen fibre, glycolipids e fosfolipidica will be dimostrato come pink to red to purple color.
Se diastase o -amylase è usati per a negative controllo, the glycogen depositi sono removed leaving solo the membrana plasmatica colorazione pink. The due major tipi delle fibre sono solitamente distinguished by different intensity of colorazione.
REFERENCES:
1. Thompson, Samuel W. SELECTED HISTOCHEMICAL AND HISTOPATHOLOGICAL METHODS,
Charles C. Thomas, Springfield, IL, 1966.
2. Sheehan, D.C. e Hrapchak, B.B., THEORY AND PRACTICE OF HISTOTECHNOLOGY,
2nd Edition; Battelle Memorial Institute, Columbus, OH, 1987.
| PREPARED BY | G. JAMES PLANER | 09/21/90 |
| SUPERCEDES REVISION | G. JAMES PLANER | 06/30/95 |
| REVISED BY | KAREN BIESER | 07/18/97 |
| ADOPTED BY | ALAN PESTRONK, M.D. | |
| REVIEWED BY | ||
| REVIEWED BY | ||
| REPLACED |
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13 agosto 1997
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