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TRADUZIONE di Natale Marzari
 

LABORATORIO della CLINICA

PROTOCOLLO COLORAZIONE ROSSO CONGO
(MODIFIED dal JOHNS HOPKINS)

PRINCIPLE:

Questa colore è usati per the Visione detection of amyloid nei muscolare e nervo fresche frozen sezioni nei pazienti che hanno amyloidosis. The dyeing of amyloid è by a mechanism simile to the direct textile dyeing of cotone. The linearity della dye configuration permette hydrogen bonding della azo e amine gruppi della dye to similarly spaced carboidrati hydroxyl radicals della amyloid substance. The use di una colorazione soluzione contenente alto content of alcohol e libero alkali rilascia native interna hydrogen bonding fra adiacente polysaccharide catene e creates più potenziale siti per the Legante della dye.

QUALITY ASSURANCE:

A section di una biopsy (#93255) con abbondanti amyloid nel muscolare è usati come a positive controllo.

SPECIMEN REQUIRED: Snap frozen human striated muscolare. (Use the isopentano freezing method descritti altrove.)

METHOD:

Fixation: Nessuno, use snap frozen tissue.

Tecnica: Cut 10 - 16 micron (12 µm) sezioni nei cryostat dal snap frozen biopsy. Attach uno o più sezioni to a No.1½, 22 mm square coverslip.

Equipment:
Ceramic colorazione rack - Thomas Scientific #8542-E40
Columbia colorazione dish - Thomas Scientific #8542-C12
Columbia colorazione dish(jar) - Thomas Scientific #8542-E30
Forceps
Latex gloves
Filter paper (Baxter #F2217-110, Grade 363, Qualitative)

Reagents:
Absolute alcohol (100% ethanol) Quantum FLAMMABLE (store at room temperature nei a flammable cabinet)
Congo Rossa - certified (C.I. 22120)(Sigma C-6277, CAUTION : POSSIBLE TERATOGEN, store at room temperature)
Harris Hematoxylin Stain, acidified (lerner Laboratories #1931382) store at room temperature Permount (Fisher #SP15-100) FLAMMABLE, HEALTH HAZARD, store at room temperature
Reagent alcohol, ACS - HPLC Fisher A995-4 o histochemical Fisher A962-4, FLAMMABLE, TOXIC,TERATOGENIC, store at room temp. nei flammable cabinet
Sodio chloride (Sigma S-7653, store at room temp.)
Xylenes - Fisher #HC700-1GAL, FLAMMABLE, store room temperature nei flammable cabinet)

Solutions:

I. Congo Rossa soluzione
Sodio chloride 2 g: Dissolved nei deionized acqua 20 ml
Congo Rossa powder 0.5 g: Suspended nei 100 % absolute alcohol 80 ml
Combine the due solutions (store at room temperature per mesi)

II. Alcohol 50 %
Reagent alcohol ~50 ml
Deionized acqua ~50 ml

III. Alcohol 70 %
Reagent alcohol ~70 ml
Deionized acqua ~30 ml

IV. Alcohol 80 %
Reagent alcohol ~80ml
Deionized acqua ~20 ml

V. Alcohol 95 %
Reagent alcohol ~95 ml
Deionized acqua ~ 5 ml

Staining Procedure:

1. Place the coverslip con section nei a ceramic colorazione rack .

2. Immerse sezioni nei Harris Hematoxylin per 30 secondi to uno (1) minute.

3. Wash con tap acqua fino alla the acqua è chiara.

4. Filter the Congo Rossa soluzione nella a columbia colorazione dish (Thomas Scientific#8542-E40)

5. Place coverslips con sezioni nel columbia colorazione dish con the filtered Congo Rossa soluzione per 3 minuti at room temperature.

6. Wash con numerosi exchanges of deionized H2O.

7. Dehydrate nei ascending alcohol solutions (50%, 70%, 80%, 95% x 2, 100% x 2) nei columbia colorazione dish(jar)s - Thomas Scientific #8542-E30.

8. Chiari con xylene (3 - 4 x ) quindi inin columbia colorazione dish(jar)s - Thomas Scientific #8542-E30

9. Mount coverslip onto a labeled glass slide con Permount o alcuni altre suitable organico mounting medium.

Risultati:

Con the light microscope, amyloid depositi sono red to pink-red, nuclei sono blue, altre tissue elements sono largely unstained. Amiloide depositi mostrare a "apple-verde" BirifGammanza con the polarizing microscope.

REFERENCES:

1. Thompson, Samuel W. SELECTED HISTOCHEMICAL AND HISTOPATHOLOGICAL METHODS, Charles C. Thomas, Springfield, IL, 1966.

2. Barka, T. e Anderson, P.J., 1962. In: THEORY AND PRACTICE OF HISTOTECHNOLOGY, Sheehan, D.C. e Hrapchak, B.B., 2nd Edition 1980; Battelle Memorial Institute, Columbus, OH, 1987.

3. Protocollo ricevuto dalla Johns Hopkins School of Medicine.

PREPARED BY G. JAMES PLANER 09/21/90
SUPERCEDES REVISION G. JAMES PLANER 06/30/95
REVISED BY KAREN BIESER 07/18/97
ADOPTED BY ALAN PESTRONK, M.D.
REVIEWED BY
REVIEWED BY
REPLACED

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14 agosto 1997

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